Las fuentes de luz utilizadas en un microscopio de fluorescencia están diseñadas para proporcionar luz intensa en determinadas longitudes de onda de excitación, lo que hace que los fluoróforos de la muestra presenten fluorescencia y emitan luz.
Lámparas de arco
Son fuentes de luz de banda ancha que emiten en las regiones UV, visible y, en algunos casos, del infrarrojo cercano. Con estas lámparas se utilizan filtros para seleccionar la banda estrecha de longitudes de onda necesaria para excitar un fluoróforo específico.
- Lámparas de arco de mercurio (HBO): Producen luz de alta intensidad con picos espectrales intensos y característicos, especialmente en las regiones del ultravioleta cercano, violeta, azul y verde. Son muy brillantes, pero la iluminación del campo de visión puede ser poco uniforme.
- Lámparas de arco de xenón: Proporcionan una salida espectral más uniforme y continua en el rango visible que las lámparas de mercurio. Suelen preferirse para mediciones cuantitativas en las que es fundamental mantener una intensidad uniforme, aunque normalmente tienen menor potencia en algunos picos de excitación importantes.
- Lámparas de halogenuros metálicos: Ofrecen un espectro similar al de las lámparas de mercurio, pero son más estables con el tiempo, lo que supone una ventaja para la obtención de imágenes cuantitativas, y tienen una vida útil más larga.
Diodos emisores de luz (LEDs)
Los LED son populares por su larga vida útil, su baja generación de calor y la posibilidad de controlarlos de forma rápida y precisa (encendido/apagado).
- LED individuales: Cada LED suele emitir luz dentro de una banda de longitudes de onda relativamente estrecha. (20-70nm). No requieren tiempo de calentamiento ni de enfriamiento y permiten cambiar rápidamente entre longitudes de onda.
Láseres
Los láseres son altamente monocromáticos (emiten luz en un intervalo de longitudes de onda muy estrecho), lo que los hace ideales para técnicas de imagen especializadas y de alta resolución.
- Tipos: Entre los láseres habituales se encuentran los de iones de argón (p. ej., 488 nm), helio-neón (p. ej., 543 nm, 633 nm) y diversos láseres de diodo (p. ej., 405 nm).
- Aplicaciones: Son la fuente de luz principal para técnicas avanzadas como la microscopía confocal, la microscopía de fluorescencia por reflexión interna total (TIRF) y la microscopía de superresolución (p. ej., STED, PALM).
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