Los filtros ópticos deben diseñarse con precisión para ajustarse a la emisión espectral específica de la fuente de luz utilizada en microscopía de fluorescencia. Los requisitos de los filtros varían considerablemente según la fuente de iluminación. Fuente de luz Características del espectro de salida Implicaciones para el diseño del filtro Ventajas Desventajas Lámpara de arco de mercurio (HBO) Espectro discontinuo concentrado en líneas espectrales estrechas (con una anchura de ~10 nm). Alta intensidad (luminancia/radiancia) en las regiones UV y visible. Los filtros de excitación deben transmitir una o varias líneas...
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El desplazamiento de Stokes se define simplemente como la diferencia de longitud de onda entre dos puntos críticos de un fluorocromo:
1. La intensidad máxima de excitación (la longitud de onda a la que se absorbe la máxima cantidad de luz).
2. La intensidad máxima de emisión (la longitud de onda en la que la radiación fluorescente alcanza su máximo).
Como la fluorescencia implica absorber luz y después emitir luz de menor energía, la luz emitida siempre tiene una longitud de onda mayor que la luz de excitación.
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Familia de fluoróforos Fabricante Pico λEx/λEm (nm) Característica clave de rendimiento Coste/uso general Alexa Fluor 488 Invitrogen/Thermo Fisher 495/519 Estándar de referencia. Alta fotoestabilidad, brillante e insensible al pH. Alta FITC (fluoresceína) Genérico (varios) 495/519 Estándar clásico. Espectralmente idéntico. Principal desventaja: baja fotoestabilidad y sensibilidad al pH (menor intensidad en entornos ácidos). Bajo EGFP / GFP N/A (Proteína fluorescente) 488/507 Obtención de imágenes de células vivas. Está codificada genéticamente, lo que permite la expresión interna. N/A (Clonación) DyLight 488 Thermo Fisher / Abcam 493/518 Excelente equilibrio. Alta fotoestabilidad y brillo,...
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