Was erkennt die Fluoreszenzmikroskopie?

Fluoreszenzmikroskopie

Die Fluoreszenzmikroskopie ist eine leistungsstarke Technik, mit der die Eigenschaften organischer oder anorganischer Substanzen mithilfe des Phänomens der Fluoreszenz erkannt und untersucht werden können. Im Gegensatz zur herkömmlichen Lichtmikroskopie, bei der Proben mit durchgelassenem Licht betrachtet werden, wird die Probe bei der Fluoreszenzmikroskopie mit Licht einer bestimmten Wellenlänge beleuchtet, wodurch die Probe Licht einer anderen, normalerweise längeren Wellenlänge aussendet.

Funktionsprinzip

Es funktioniert nach dem Prinzip der Anregung und Emission . Moleküle in der Probe absorbieren Licht einer Wellenlänge (Anregung) und emittieren dann Licht einer anderen Wellenlänge (Emission). Dieses emittierte Licht ist das, was beobachtet wird und liefert kontrastreiche Bilder der Probe.

Anwendungen

Die Fluoreszenzmikroskopie wird in vielen Bereichen eingesetzt, beispielsweise:

• Biologie – zum Studium der Zellstrukturen und -funktionen.
• Medizin – zur Diagnose von Krankheiten und in der Immunfluoreszenz zum Nachweis spezifischer Proteine ​​oder Mikroorganismen.
• Materialwissenschaft – zur Analyse von Materialeigenschaften.

Arten der Fluoreszenzmikroskopie

Es gibt verschiedene Arten der Fluoreszenzmikroskopie, darunter:

• Direkte Fluoreszenzmikroskopie – verwendet einen fluoreszierenden Farbstoff, der sich direkt an das Zielobjekt bindet.
• Indirekte Fluoreszenzmikroskopie – dabei wird ein unmarkierter Primärantikörper verwendet, der sich an das Ziel bindet, und ein fluoreszenzmarkierter Sekundärantikörper, der sich an den Primärantikörper bindet.
• Konfokale Mikroskopie – liefert hochauflösende Bilder durch Fokussierung eines einzelnen Lichtpunkts und Eliminierung unscharfen Lichts.

Vorteile und Einschränkungen

Vorteile:

• Hohe Spezifität und Sensitivität durch die Verwendung von Fluoreszenzmarkern.
• Fähigkeit, lebende Zellen in Echtzeit zu visualisieren und zu quantifizieren.

Einschränkungen:

• Photobleichen – das Fluoreszenzsignal kann mit der Zeit durch Lichteinwirkung verblassen.
• Phototoxizität – das zur Anregung verwendete Licht kann lebende Zellen schädigen.