フローサイトメトリーで使用される染料は何ですか?

フローサイトメトリーで使用される染料

フローサイトメトリーは、細胞または粒子の集団の物理的および化学的特性を検出および測定するために使用される技術です。このプロセスでは、さまざまな蛍光染料を使用して細胞とその成分を染色します。これらの染料は、レーザーによって励起されると、さまざまな波長の光を発します。染料の選択は、特定のアプリケーション、フローサイトメーターで使用できるレーザーとフィルター、および複数のラベルが使用される場合に他の染料との重複を避ける必要性によって異なります。

よく使われる染料

• フルオレセインイソチオシアネート (FITC): 488 nm レーザーによって励起される明るい緑色の蛍光染料。
• フィコエリトリン (PE):シアノバクテリアと真核藻類に由来するタンパク質で、488 nm または 532 nm のレーザーによって励起され、黄色からオレンジ色の蛍光を発します。
• アロフィコシアニン (APC): 633 nm または 647 nm のレーザーによって励起され、赤色領域で発光するタンパク質。
• ペリジニンクロロフィルタンパク質 (PerCP):渦鞭毛藻類由来のタンパク質複合体で、フローサイトメトリーでの使用に適した吸収範囲を持ち、通常は 488 nm レーザーで励起されます。
• PE-Cy5: PE が Cy5 に化学的に結合したタンデム染料で、488 nm または 532 nm レーザーで励起されると遠赤色領域で発光します。
• PE-Cy7: PE-Cy5 に似ていますが、より長い波長で放射します。

染料の選択に関する考慮事項

染料は特定の用途に基づいて選択されます。要因には以下が含まれます。
-蛍光色素の輝度:染料の固有の蛍光強度。
-励起および発光スペクトル:フローサイトメーターで使用可能なレーザーラインおよびフィルターと染料の互換性。
-パネルのサイズと複雑さ:マルチカラーアッセイでは、スペクトルの重複を最小限に抑えるためにパネルのサイズと複雑さが重要です。
-蛍光色素とタンパク質の比率:共役染料の場合、この比率は明るさと凝集に影響します。
-細胞の種類と抗原:特定の染料は、標的となる細胞の種類と抗原に応じて異なる方法で結合する場合があります。

マルチカラーフローサイトメトリーパネル

マルチカラーフローサイトメトリーでは、複数の蛍光色素を同時に使用して、異なるターゲットをラベル付けします。このため、発光スペクトルの重複を回避するための慎重な計画が必要となり、データの誤解釈につながる可能性があります。補正は、スペクトルの重複を補正するためによく使用されます。これは、ある色素の蛍光信号が別の色素のチャネルで検出された場合に、それを電子的に補正するプロセスです。

結論

蛍光色素はフローサイトメトリーにおいて重要な役割を果たし、複数のパラメータの同時分析を可能にします。色素の選択はフローサイトメトリー実験の設計において重要なステップであり、結果の品質と解釈可能性に大きな影響を与える可能性があります。