荧光显微镜使用的光源有哪些?

荧光显微镜上使用的光源旨在提供特定激发波长的强光,以使样本中的荧光团发出荧光(发光)。

弧光灯

这些是路带光源,发射紫外、可见光,有时也发射近红外光谱。这些灯配有滤光片,用于选择激发特定荧光团所需的特定窄波段。
  • 汞弧灯 (HBO):产生具有特征性强光谱峰的高强度光,尤其是在近紫外、紫色、蓝色和绿色区域。它们非常明亮,但整个视野的照明可能不均匀。

  • 氙弧灯:与汞灯相比,氙弧灯在可见光范围内提供更平滑、更连续的光谱输出。在要求均匀强度的定量测量中,氙弧灯通常是首选,尽管在某些关键激发峰处,氙弧灯的功率通常较低。

  • 金属卤化物灯:提供与汞灯相似的光谱,但随着时间的推移更稳定,这对于定量成像来说是一个优势,并且具有更长的使用寿命。

发光二极管(LED)

LED 因其寿命长、发热量低、能够快速精确地控制(开/关切换)而广受欢迎。
  • 单个LED:每个LED通常发射相对较窄的波长范围(20-70nm)内的光。无需预热或冷却时间,并允许在波长之间快速切换。

激光器

激光具有高度单色性(发射波长范围非常窄的光),使其成为高分辨率和专业成像技术的理想选择。
  • 类型:常见的激光器包括氩离子激光器(例如 488 nm)、氦氖激光器(例如 543 nm、633 nm)和各种二极管激光器(例如 405 nm)。
  • 应用:它们是共聚焦显微镜全内反射荧光 (TIRF) 显微镜超分辨率显微镜(例如 STED、PALM)等先进技术的主要光源。

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