荧光显微镜是一种高度专业化的光学仪器,它利用荧光和磷光研究有机或无机物质的性质,而不是仅依靠传统的光反射、散射或吸收。
它在生物学和材料科学中极具价值,因为研究人员可以凭借高对比度和高特异性,精确定位样品中的特定结构、分子或蛋白质。
工作原理
其基本原理依赖于一种称为荧光团的分子。当特定高能波长的光(激发光)照射荧光团时,荧光团会吸收能量,并几乎立即发射能量较低、波长较长的光(发射光)。
该显微镜用于以激发光强烈照射样品,随后仅采集发射光,从而在暗背景上形成目标结构的明亮图像。

核心光学元件
为了实现这种特定的光线调控,荧光显微镜采用一组专门配置的光学元件,这些元件通常装在“滤光片立方体”内:
- 光源: 提供激发所需的高强度光。常见光源包括激光器、LED、汞蒸气灯和氙弧灯。
- 激发滤光片: 放置在光源光路中的光学滤光片。它仅透射激发样品中荧光团所需的特定波长,并截止所有其他波长。
- 二向色镜(或分光镜): 以相对光路 45° 的角度放置。其设计用于反射短波长激发光,使其向下穿过物镜照射样品。同时,它可透射从样品返回的较长波长发射光,使其直接通过并到达探测器。
- 物镜: 将激发光聚焦到样品上,并收集相对微弱的发射荧光,将其向上引导回二向色镜。
- 发射滤光片(或屏障滤光片): 位于二向色镜与探测器(或目镜)之间。它可截止绕过二向色镜的散射激发光,确保只有纯净的发射荧光到达最终图像。
- 探测器:使用高灵敏度相机(例如 CCD、CMOS 或光电倍增管)采集最终图像,因为荧光信号通常较弱。
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