Wie misst ein Mikroplatten-Reader die Absorption?
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Verstehen, wie ein Mikroplatten-Reader die Absorption misst
Ein Mikroplattenlesegerät, ein unverzichtbares Werkzeug in verschiedenen wissenschaftlichen Bereichen wie Biologie und Chemie, misst präzise die Absorption von Proben in Mikroplattenvertiefungen. Das grundlegende Prinzip der Absorptionsmessung mit einem Mikroplattenlesegerät umfasst die spektrophotometrische Analyse von Proben. Diese ausführliche Erklärung umreißt die Schritte und Mechanismen des Prozesses.
Schlüsselkomponenten und Prozess
Lichtquelle: Der Prozess beginnt mit einer Lichtquelle im Mikroplatten-Lesegerät, normalerweise einer Xenon-Blitzlampe oder einer Wolfram-Halogenlampe, die Licht über ein breites Wellenlängenspektrum aussendet.
Auswahl der Wellenlänge: Vor der Messung wird die gewünschte Wellenlänge mithilfe eines Monochromators oder Filters ausgewählt. Diese Auswahl ist entscheidend, da der Absorptionswert spezifisch für diese bestimmte Wellenlänge ist und der Spitzenabsorption der gemessenen Substanz entspricht.
Transmission durch die Probe: Das ausgewählte Licht wird dann auf die Vertiefungen der Mikroplatte gerichtet, die die Proben enthalten. Die Lichtmenge, die durch die Probe dringt (Transmissionsgrad), variiert je nach Konzentration der Substanz in der Vertiefung.
Detektion: Licht, das durch die Probe hindurchgegangen ist, wird dann von einem Detektor erfasst. Dieser Detektor misst die Intensität des durchgelassenen Lichts. Die Absorption (A) wird auf Grundlage des Lambert-Beer-Gesetzes berechnet, A = -log10(T), wobei T die Transmission ist (Verhältnis der Intensität des Lichts, das durch die Probe hindurchgeht, zur Intensität des Lichts, bevor es in die Probe eintritt).
Analyse: Abschließend analysiert die Software des Mikroplatten-Lesegeräts die Absorptionswerte, sodass die Forscher anhand zuvor erstellter Kalibrierungskurven auf die Konzentration des Analyten in jeder Probe schließen können.
Anwendung
Mikroplattenlesegeräte sind vielseitige Instrumente, die in verschiedenen Tests verwendet werden, darunter Enzymimmunoassays (ELISA), Protein- und Nukleinsäurequantifizierung und Zelllebensfähigkeitstests. Ihre Fähigkeit, die Absorption mehrerer Proben gleichzeitig schnell und genau zu messen, macht sie sowohl in der Forschung als auch in der Diagnostik von unschätzbarem Wert.