蛍光顕微鏡はどのように機能するのでしょうか?

蛍光顕微鏡では、光の特定の励起とフィルタリングが必要なため、光路は通常の光学顕微鏡とはまったく異なります。光の移動経路の内訳は次のとおりです。

光源

この旅は、強力な光源（多くの場合、キセノンアークランプまたは高出力 LED）から始まります。この光源は、さまざまな色（波長）を含む幅広いスペクトルの白色光を放射します。

(左が従来のもの、右が落射照明)

エピイルミネーションとはどういう意味ですか?

対物レンズは、励起光をサンプルに集中させ、発光光を収集するために使用されます。蛍光顕微鏡の場合、これはユーザーが励起光にさらされないことを意味します。

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次に、光は励起フィルターを通過します。このフィルターは色彩の門番のような役割を果たし、特定の範囲の波長のみを通過させます。選択された範囲は、実験で使用されている蛍光体の吸収ピークと一致する必要があります。

フィルタリングされた光は、賢い交通警官のような役割を果たす二色性ミラーに当たります。二色性ミラーは、下から来る特定の励起波長をサンプルに反射します。これが蛍光体を励起する光です。

反射された励起光はサンプルに到達します。蛍光体の吸収範囲が選択した励起波長と一致する場合、光は蛍光体によって吸収され、励起状態になります。

励起状態では、蛍光体は長く留まりません。吸収したエネルギーをほぼ即座に放出しますが、特別な方法、つまり吸収した光よりも長い波長 (低いエネルギー) の光を放出します。この放出された光が蛍光体を「光らせる」のです。

放出された蛍光は対物レンズを通って戻ります。ここで、別のフィルターである発光フィルターが作用します。このフィルターは、残りの励起光 (サンプルによって反射された光) をブロックし、蛍光体からの特定の蛍光発光波長のみを通過させます。

最後に、フィルターされた蛍光は、目視観察用の接眼レンズまたは画像キャプチャ用の検出器（カメラなど）に到達します。これにより、研究者は蛍光体からの発光信号のみを観察でき、サンプル内の関心のある特定の構造または分子を強調表示できます。