Atto 488 ラベリングのプロトコルは何ですか?

Atto 488 ラベル付けのプロトコル

Atto 488 は、生体分子、特にタンパク質や核酸にラベルを付けるために使用される高性能の蛍光ラベルであり、さまざまな生物学的アッセイでそれらの検出と分析を可能にします。次のプロトコルは、Atto 488 ラベル付けの一般的な手順を概説しています。

必要な材料

• アト 488 NHS エステル
• 緩衝液: 0.1 M 炭酸水素ナトリウム (pH 8.3)
• ラベルを付けるタンパク質または核酸
• 透析チューブまたは脱塩カラム
• UV-Vis分光光度計

プロトコル手順

1. Atto 488 NHS エステルを無水 DMSO または DMF に溶解して 10 mM のストック溶液を作成します。
2. 最適な標識条件を確保するために、バッファーの pH (0.1 M 重炭酸ナトリウム、pH 8.3) を調整します。
3. Atto 488 溶液を生体分子溶液と混合します。染料と生体分子の典型的なモル比は、必要な標識の程度に応じて 1:1 ～ 10:1 です。
4. 染料の光退色を防ぐために、反応混合物を暗所で室温で 1 時間インキュベートします。
5. 未反応の染料を透析または適切な緩衝液に対する脱塩カラムを使用して除去します。
6. UV-Vis 分光光度計で標識度 (DOL) を測定します。Atto 488 とタンパク質または核酸の吸光度を使用して DOL を計算します。

重要な注意事項

• 光退色を防ぐため、Atto 488 染料を常に光から保護してください。
• 標識の効率と複合体の安定性は、生体分子によって異なる場合があります。
• 特定の用途に基づいて、染料と生体分子のモル比と反応条件を最適化します。
• ラベルを付ける生体分子が、NHS エステルと反応する可能性があるため、第一級アミン (トリス、グリシンなど) を含まないバッファー内にあることを確認してください。

Atto 488 標識は、分子生物学や生化学のさまざまな用途で生体分子に蛍光タグを付ける多目的技術です。概要を説明したプロトコルに従い、特定のニーズに基づいて条件を最適化することで、標識の成功とアッセイでの正確な検出が保証されます。