SyronOptics

荧光
荧光团用不同光源的比较
光学滤光片必须经过精确设计，以匹配荧光显微镜所用光源的特定发射光谱。滤光片要求会因照明光源的不同而有显著差异。 光源 输出光谱特性 对滤光片设计的影响 优点 缺点 汞弧灯（HBO） 非连续光谱，能量集中在窄谱线内（宽度为 ~10 nm）。在 UV 和可见光区域具有高亮度（光亮度/辐亮度）。 激发滤光片必须透射一条或多条特定的汞谱线。可以使用宽带滤光片，但可能会增加自发荧光噪声。 历史上最常用的光源；亮度/光亮度高。 输出不连续。额定寿命较短（~200 小时）。 氙弧灯（XBO） 在可见光范围内具有相对连续的光谱。在近红外（NIR）区域的输出高得多。 激发滤光片需要在NIR（>800 nm）区域具有出色的截止性能。滤光片必须能够承受更高的热负荷。 由于光谱连续，因此适合定量分析。 亮度不及同等功率的汞灯。较大的弧光尺寸会限制可聚焦的光。额定寿命较短（~400小时）。 金属卤化物弧光灯 光谱通常与汞弧灯相似，但发射线之间的相对强度更高。IR输出较高。 需要妥善处理较高的IR输出。 使用寿命长（最长可达2000小时）。一体式椭圆反射镜使对准操作简单且稳定。 由于弧光尺寸较大（~1.2 mm），平均亮度与氙弧灯相近。 发光二极管（LED） 发射光的光谱带宽相对较窄（10 to 40 nm FWHM）。可用光谱波段数量有限。不同批次之间的峰值波长存在差异（最高可达20 nm）。 激发滤光片的设计较简单。窄光谱波段无需较宽的截止范围。 使用寿命长（10,000+小时）。可非常快速地控制输出（毫秒量级）。在其窄波段内，亮度几乎与弧光灯相当。 可用光谱波段有限，缺少强绿光光源。不同批次之间存在差异，且输出对温度和电流敏感（偏移最高可达5 nm）。 激光器（固体/DPSS） 在狭窄的单色光谱带内具有极高亮度，通常为偏振光。 激发滤光片必须截止整个输出光谱（例如，DPSS激光器在1064 nm处的NIR输出）。滤光片应主要通过反射来衰减光线，以降低热负荷。分光镜的设计必须考虑偏振条件。 因亮度高而广泛用于共聚焦显微镜。 所有滤光片组件均需满足更严格的光学质量要求（TWD、楔角）。激发滤光片必须具有高反射率。 阅读详细内容…
什么是斯托克斯位移？
斯托克斯位移的简单定义是荧光染料两个关键点之间的波长差： 1. 峰值激发强度（光吸收达到最大值时的波长）。 2. 峰值发射强度（以荧光形式辐射的光达到最大强度时的波长）。 由于荧光过程先吸收光，然后发射能量较低的光，因此发射光的波长始终比激发光更长。 阅读详细内容…
绿色通道染料
荧光团系列 制造商 λEx/λEm峰值 (nm) 关键性能特征 成本/一般用途 Alexa Fluor 488 Invitrogen/Thermo Fisher 495/519 公认的标准选择。光稳定性高、亮度高且不受pH影响。 高 FITC（荧光素） 通用（多种） 495/519 经典标准染料。光谱特性相同。主要缺点：光稳定性差，并且对pH敏感（在酸性环境中亮度较低）。 低 EGFP / GFP N/A（荧光蛋白） 488/507 活细胞成像。由基因编码，可在细胞内部表达。 N/A（克隆） DyLight 488 Thermo Fisher / Abcam 493/518 综合性能均衡。光稳定性和亮度高，常用作 Alexa Fluor 488 的高性价比替代品。 中等价位 CF488A Biotium 490/515 高亮度 & 高稳定性。专为高性能应用而设计，是Alexa Fluor 488的直接竞品。 中等范围 iFluor 488 AAT Bioquest 493/516 高亮度 & 亲水性。专为实现高亮度和更好的偶联性能而设计。 中等范围 Oregon Green 488 Invitrogen/Thermo Fisher 492/517 光稳定性高。光稳定性优于 FITC，但亮度通常低于 Alexa Fluor 488。 中等范围 Cy2 Cytiva 492/510 旧型染料。一种较早期的花菁染料，光谱特性相似，但通常远不如新型替代染料稳定。 低 阅读详细内容…