광학 필터는 형광 현미경에 사용되는 광원의 고유한 방출 스펙트럼에 정확히 맞도록 설계해야 합니다. 필터 요구 사항은 조명 광원에 따라 크게 달라집니다. 광원 출력 스펙트럼 특성 필터 설계에 미치는 영향 장점 단점 수은 아크 램프(HBO) 좁은 스펙트럼선(선폭 ~10 nm)에 집중된 불연속 스펙트럼. UV 및 가시광선 영역에서 높은 밝기(휘도/복사휘도). 여기 필터는 하나 이상의 특정 수은선을 투과해야 합니다. 광대역 필터를 사용할 수도 있지만 자가형광 노이즈가 증가할 위험이 있습니다. 역사적으로 가장 널리 사용된 광원. 높은 밝기/휘도. 불연속 출력. 짧은 정격 수명(~200시간). 제논 아크 램프(XBO) 가시광 영역에서 비교적 연속적인 스펙트럼을 제공합니다. 근적외선(NIR)에서는 출력이 훨씬 높습니다....
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스토크스 이동은 형광 색소의 두 임계점 사이의 파장 차이로 간단히 정의됩니다:
1. 최대 여기 강도(빛이 최대로 흡수되는 파장).
2. 최대 방출 강도(형광으로 방출되는 빛의 강도가 최대가 되는 파장).
형광은 빛을 흡수한 후 더 낮은 에너지의 빛을 방출하는 과정이므로, 방출광의 파장은 항상 여기광보다 깁니다.
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형광단 계열 제조사 λEx/λEm 피크 (nm) 주요 성능 특성 비용/일반 용도 Alexa Fluor 488 Invitrogen/Thermo Fisher 495/519 표준으로 인정되는 선택입니다. 광안정성이 높고 밝으며 pH에 민감하지 않습니다. 높음 FITC(플루오레세인) 일반(복수) 495/519 전통적인 표준 형광 염료. 스펙트럼 특성은 동일합니다. 주요 단점: 광안정성이 낮고 pH에 민감함(산성 환경에서 밝기가 감소함). 낮음 EGFP / GFP N/A(형광 단백질) 488/507 살아 있는 세포 이미징. 유전적으로 암호화되어 세포 내부에서 발현될 수 있습니다. N/A(클로닝) DyLight 488 Thermo Fisher / Abcam 493/518 뛰어난 균형. 광안정성과 밝기가 높으며 Alexa Fluor 488의 경제적인 대안으로 자주 사용됩니다. 중간 가격대 CF488A Biotium 490/515 높은...
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