荧光
荧光团中不同光源的比较
光学滤光片必须经过精确设计，以匹配荧光显微镜中所用光源的特定光谱输出。滤光片的要求会因照明光源的不同而发生显著变化。 光源 输出频谱特性 滤波器设计启示 优势 缺点 水银弧光灯（HBO） 非连续光谱集中在窄谱线（宽度约10纳米）上。在紫外和可见光范围内具有高亮度（亮度/辐射度）。 激发滤光片必须能够透射一种或多种特定的汞谱线。虽然可以使用宽带滤光片，但可能会增加自发荧光噪声。 最常见的历史资料来源；高亮度/明度。 非连续输出。额定寿命短（约200小时）。 氙弧灯（XBO） 在可见光范围内光谱相对连续。在近红外（NIR）波段输出功率更高。 激发滤光片需要对近红外波段（>800 nm）具有优异的阻挡性能。滤光片必须能够承受更高的热负荷。 由于其光谱连续，因此是定量分析的首选方法。 亮度不如同等功率的汞灯。较大的电弧尺寸限制了光线的聚焦范围。额定寿命较短（约400小时）。 金属卤化物弧光灯 光谱大致与汞弧灯相似，但各发射谱线之间的相对强度更高。红外波段输出功率高。 需要处理高红外输出。 使用寿命长（长达2000小时）。由于内置椭圆反射器，对准简便稳定。 由于弧光尺寸较大（~1.2 毫米），平均亮度与氙弧灯相似。 发光二极管（LED） 发射光的光谱带宽相对较窄（半峰全宽 10 至 40 nm）。可用光谱波段数量有限。不同批次间的峰值波长存在差异（高达 20...
荧光团中不同光源的比较
光学滤光片必须经过精确设计，以匹配荧光显微镜中所用光源的特定光谱输出。滤光片的要求会因照明光源的不同而发生显著变化。 光源 输出频谱特性 滤波器设计启示 优势 缺点 水银弧光灯（HBO） 非连续光谱集中在窄谱线（宽度约10纳米）上。在紫外和可见光范围内具有高亮度（亮度/辐射度）。 激发滤光片必须能够透射一种或多种特定的汞谱线。虽然可以使用宽带滤光片，但可能会增加自发荧光噪声。 最常见的历史资料来源；高亮度/明度。 非连续输出。额定寿命短（约200小时）。 氙弧灯（XBO） 在可见光范围内光谱相对连续。在近红外（NIR）波段输出功率更高。 激发滤光片需要对近红外波段（>800 nm）具有优异的阻挡性能。滤光片必须能够承受更高的热负荷。 由于其光谱连续，因此是定量分析的首选方法。 亮度不如同等功率的汞灯。较大的电弧尺寸限制了光线的聚焦范围。额定寿命较短（约400小时）。 金属卤化物弧光灯 光谱大致与汞弧灯相似，但各发射谱线之间的相对强度更高。红外波段输出功率高。 需要处理高红外输出。 使用寿命长（长达2000小时）。由于内置椭圆反射器，对准简便稳定。 由于弧光尺寸较大（~1.2 毫米），平均亮度与氙弧灯相似。 发光二极管（LED） 发射光的光谱带宽相对较窄（半峰全宽 10 至 40 nm）。可用光谱波段数量有限。不同批次间的峰值波长存在差异（高达 20...
什么是斯托克斯位移？
斯托克斯位移简单定义为荧光染料两个临界点之间的波长差： 1.峰值激发强度（吸收光的最大波长）。 2.峰值发射强度（以荧光形式辐射的光的最大波长） 。 由于荧光涉及吸收光，然后辐射能量较低的光，因此发射光的波长总是比激发光的波长长。
什么是斯托克斯位移？
斯托克斯位移简单定义为荧光染料两个临界点之间的波长差： 1.峰值激发强度（吸收光的最大波长）。 2.峰值发射强度（以荧光形式辐射的光的最大波长） 。 由于荧光涉及吸收光，然后辐射能量较低的光，因此发射光的波长总是比激发光的波长长。
绿色通道染料
荧光团家族 制造商 λEx/λEm 峰值 (nm) 关键性能特征 成本/一般用途 Alexa Fluor 488 Invitrogen/Thermo Fisher 495/519 黄金标准。光稳定性高，亮度高，对pH值不敏感。 高的 FITC（荧光素） 通用（多个） 495/519 经典标准型。光谱相同。主要缺点：光稳定性差，对pH值敏感（在酸性环境下亮度降低）。 低的 EGFP/GFP 不适用（荧光蛋白） 488/507 活细胞成像。基因编码，允许内部表达。 不适用（克隆） DyLight 488 赛默飞世尔科技/Abcam 493/518 优异的平衡性。具有高光稳定性和亮度，常被用作...
绿色通道染料
荧光团家族 制造商 λEx/λEm 峰值 (nm) 关键性能特征 成本/一般用途 Alexa Fluor 488 Invitrogen/Thermo Fisher 495/519 黄金标准。光稳定性高，亮度高，对pH值不敏感。 高的 FITC（荧光素） 通用（多个） 495/519 经典标准型。光谱相同。主要缺点：光稳定性差，对pH值敏感（在酸性环境下亮度降低）。 低的 EGFP/GFP 不适用（荧光蛋白） 488/507 活细胞成像。基因编码，允许内部表达。 不适用（克隆） DyLight 488 赛默飞世尔科技/Abcam 493/518 优异的平衡性。具有高光稳定性和亮度，常被用作...