Die Stokes-Verschiebung ist einfach als die Wellenlängendifferenz zwischen zwei entscheidenden Punkten eines Fluorochroms definiert:
1. Die maximale Anregungsintensität (die Wellenlänge, bei der die Lichtabsorption maximal ist).
2. Die maximale Emissionsintensität (die Wellenlänge, bei der die Fluoreszenzstrahlung ihr Maximum erreicht).
Da bei der Fluoreszenz Licht absorbiert und anschließend Licht mit geringerer Energie emittiert wird, hat das emittierte Licht stets eine längere Wellenlänge als das Anregungslicht.